Calibrer les pipettes

Une pipette est un type d`équipement de laboratoire utilisé pour mesurer et transférer de très petites quantités de liquide. L`exactitude et la précision de la mesure par pipette sont nécessaires car tout écart dans les volumes distribués peut affecter les résultats d`une expérience. Pour garantir l`exactitude, il est nécessaire de vérifier l`étalonnage de la pipette tous les quelques mois. Le processus d`étalonnage permet de vérifier que l`équipement distribue les volumes corrects afin qu`il puisse être rectifié s`il n`est pas.

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Partie 1 sur 2: Vérification de l`étalonnage

Image intitulée Do Pipette Calibration Step 1
1. Rassemblez le matériel nécessaire. Pour vérifier l`étalonnage d`une pipette, vous aurez besoin d`une pipette, de pointes de pipette, d`eau distillée, d`un bécher, d`un thermomètre, d`une balance et de plats. La balance doit être spécifique aux microgrammes pour calibrer les micropipettes avec un maximum de 1 µl.
  • Vous n`avez pas besoin de plus de 5 ml d`eau. Remplir la tasse avec l`eau.
  • Assurez-vous que les pointes de pipette sont bien ajustées.
Image intitulée Do Pipette Calibration Step 2
2. Mesurer la température de l`eau distillée. Placer le thermomètre dans l`eau et laisser reposer au moins une minute. Si la ligne rouge sur le thermomètre bouge toujours, laissez-la encore une minute. Après une minute, notez la température dans un cahier. Retirez le thermomètre et séchez-le lorsque vous avez terminé.
  • La température de l`eau est importante pour les calculs qui sont effectués pour vérifier l`étalonnage.
  • Image intitulée Do Pipette Calibration Step 3
    3. Placer la balance sur la balance et la mettre à zéro. Idéalement vous utilisez une balance avec des portes et une pièce isolée. Placez le bol dans la pièce et fermez les portes. S`il n`y a pas de portes, il suffit de mettre le bol sur la balance. Appuyez sur le bouton « Zéro » ou « Tare » et attendez que la balance indique zéro.
  • En mettant la balance à zéro, le poids du bol en plastique n`est pas inclus et il devient possible de mesurer uniquement le poids de ce que vous mettez dans le bol.
  • Image intitulée Do Pipette Calibration Step 4
    4. Préparer la pipette pour l`étalonnage. Essuyez la pipette avec de l`éthanol pour tuer tous les contaminants avant de commencer - assurez-vous également que la pointe de la pipette ne se bouche pas. Placez la bonne pointe à l`extrémité et réglez le volume que vous souhaitez tester.
  • Pour l`étalonnage, testez à la fois le plus petit et le plus grand volume que la pipette peut fournir.
  • Image intitulée Do Pipette Calibration Step 5
    5. Rincer la pointe avant de calibrer. Appuyez sur le bouton jusqu`à la première butée et insérez la pointe dans l`eau distillée de manière à ce qu`environ 2 mm soient immergés dans le liquide. Relâchez le bouton pour aspirer du liquide, puis redistribuez le liquide en appuyant sur le bouton. Répétez trois fois pour rincer la pointe.
  • Appuyez sur le bouton jusqu`à la deuxième butée pour distribuer tout liquide restant dans la pointe, puis retirez la pipette de l`eau.
  • Image intitulée Do Pipette Calibration Step 6
    6. Aspirer le volume d`étalonnage. Avec la pointe hors du liquide, appuyez sur le bouton jusqu`à la première butée. Placez environ 2 mm de la pointe dans l`eau distillée et relâchez le bouton pour aspirer le liquide dans la pointe. Attendre environ une seconde avant de retirer la pointe de l`eau.
  • Assurez-vous que la pointe est complètement immergée tout au long du processus d`aspiration. Vous ne voulez pas de bulles dans la pointe, sinon le résultat ne sera pas bon.
  • Image intitulée Do Pipette Calibration Step 7
    sept. Doser le liquide dans la balance sur la balance. Placez la pointe contre le fond du bol et poussez le bouton vers le bas jusqu`à la première butée. Déplacez-vous à un autre endroit, légèrement à l`écart de l`eau, et appuyez sur le bouton jusqu`au deuxième arrêt. Maintenez le bouton enfoncé et soulevez la pointe de la balance.
  • Gardez l`embout sur la pipette, car vous l`utiliserez à nouveau pour faire d`autres tests d`étalonnage. Assurez-vous que la pointe ne touche rien.
  • Image intitulée Do Pipette Calibration Step 8
    8. Enregistrer le poids indiquant la balance. Fermer la porte lors de l`utilisation d`une balance dans une pièce isolée. Attendez que les valeurs arrêtent de changer. Écrivez cette valeur dans votre cahier.
  • Il est important d`attendre que le nombre se stabilise avant de l`écrire. Vos lectures seront fausses si vous n`attendez pas.
  • Image intitulée Do Pipette Calibration Step 9
    9. Répétez ce processus jusqu`à ce que vous ayez pris au moins 10 mesures. Mettre la balance à zéro, rincer la pointe, aspirer le même volume, distribuer le volume, puis prendre le poids. Vous avez besoin de plusieurs enregistrements du même volume, puis vous pouvez faire la moyenne de tous les enregistrements ensemble.
  • Vous pouvez répéter ce même processus avec des volumes différents, à condition de prendre plusieurs mesures par volume.
  • Partie 2 sur 2: Calcul des résultats

    Image intitulée Do Pipette Calibration Step 10
    1. Utiliser la formule du volume calculé. La formule pour calculer le volume distribué par la pipette est V = w * Z, où w est le poids de l`eau, Z est le facteur de conversion basé sur la densité de l`eau et V est le volume calculé de la quantité d`eau a été dispensé.
    • Vous pouvez trouver la variable Z en recherchant la densité de l`eau à l`aide de la température enregistrée au début de l`expérience.
    • Par exemple : Si la température de l`eau était de 23°C, vous supposez une valeur Z de 1,0035 µg/mg.
    Image intitulée Do Pipette Calibration Step 11
    2. Calculer la moyenne des essais répétés. Vous devez avoir pesé le volume d`eau distribué par la pipette au moins 10 fois. Pour calculer la moyenne de toutes ces valeurs, additionnez-les et divisez par 10. Si vous avez fait plus ou moins d`essais, additionnez chaque essai et divisez la somme par le nombre total d`essais.
  • Par exemple : Les dix poids que vous avez enregistrés pour un volume de pipette de 10 µl sont les suivants : 9,89, 10,01, 10,02, 9,99, 9,95, 10,04, 9,96, 10,01, 9,99 et 9,98.
  • La moyenne est : (9,89 + 10,01 + 10,02 + 9,99 + 9,95 + 10,04 + 9,96 + 10,01 + 9,99 + 9,98) / 10 = 99, 84/10 = 9 984
  • Image intitulée Do Pipette Calibration Step 12
    3. Appliquer les variables à l`équation et la résoudre. Une fois que vous avez déterminé les valeurs correctes pour chaque variable, vous pouvez les prendre en compte dans l`équation et résoudre le volume calculé. Pour résoudre ce problème, multipliez simplement le poids moyen de toutes les valeurs de test par la valeur Z.
  • Par exemple : V = w *Z = 9,984 *1,0035 = 10,019
  • Image intitulée Do Pipette Calibration Step 13
    4. Calculer la précision de la pipette. Pour calculer la précision, vous pouvez utiliser l`équation A = 100 x Vmoyenne/V0 utiliser, où A est la précision de la pipette, Vmoyenne le volume moyen calculé, et V0 la valeur que vous avez définie pour la pipette. La précision doit être comprise entre 99 et 101 %.
  • Si la pipette est correctement calibrée, la valeur calculée doit être très proche de la valeur réelle que vous avez définie sur la pipette.
  • Par exemple : A = 100 x Vmoyenne/V0 = 100 x 10,019/10 = 100 x 1,0019 = 100,19 %
  • Cette pipette est correctement calibrée.
  • Image intitulée Do Pipette Calibration Step 14
    5. Envoyer la pipette pour étalonnage, si nécessaire. Si votre pipette ne réussit pas le test d`étalonnage, arrêtez immédiatement de l`utiliser pour des expériences. Les pipettes sont des pièces très délicates et coûteuses de l`équipement de laboratoire. Vous ne pouvez pas réparer l`étalonnage vous-même, vous devrez donc l`envoyer pour un entretien approprié. Alternativement, certaines entreprises viendront dans votre laboratoire et calibreront vos pipettes.
  • Pour le service, veuillez contacter la société qui fabrique votre marque spécifique de pipette.

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